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本试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体膜蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。

• 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 取2×10⁷个细胞，在4℃，500×g条件下离心2～3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
  注：细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
  
• 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  
• 加入200μL冷的试剂A，置冰上10分钟。
  
• 匀浆器匀浆30～40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
  
• 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
  
• 在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
  
• 在沉淀中加入200μL冷的试剂B，混匀。
  
• 在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
  
• 弃上清。
  
• 在沉淀中加入200μL冷的试剂C，2μL蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上20分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
  
• 37℃水浴10分钟。
  
• 37℃下2000×g离心5分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层约为20μL。
  注：必需保证在37℃左右下离心，至少确保30℃以上。无可控温的离心机时，用常温的离心机在室温离心即可，适当缩短离心时间至2～3分钟。
  
• 小心吸取上层丢弃或小心吸出下层。
  
• 用80～150μL冰冷的膜蛋白稀释液稀释下层相，即得线粒体膜蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。